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                線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ活性測試盒操作程序
                
        
                更新時間：2021-04-08      瀏覽次數(shù)：1035
                
        
                 
                線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ活性測試盒操作程序
                測定意義：線粒體復合體Ⅳ又稱細胞色素C氧化酶，也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負責催化還原型細胞色素C的氧化，并最終把電子傳遞給氧，生成水。

                測定原理：還原型細胞色素C在550nm有特征光吸收，線粒體復合體Ⅳ催化還原型細胞色素C生成氧化型細胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體復合體Ⅳ酶活性。

                需要的儀器，耗材:可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

                樣本處理
                1. 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1.0 mL 提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。4 ℃ 600g 離心 10min。

                2. 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000g 離心 15min。

                3. 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅳ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。

                4. 在沉淀中加入 400uL 提取液，超聲波破碎（功率 20%，超聲 5 秒，間隔 10 秒，重復 15 次），用于復合體Ⅳ 酶活性測定，并且用于蛋白含量測定。
                 
                
        
      
                
      
                
    
                
  
                

                


                
  
                
    
                
      
      
                 
        
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